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既然要买设备,买台高的荧光定量PCR仪安心!

发布时间2022-03-01        浏览次数:179

所谓real-time Q-PCR技术,是指在PCR反应体系中加入荧光基因,利用荧光信号累积实时监测整个PCR进程,后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。

目前购买荧光定量PCR仪,一般包括:实时荧光定量PCR+开机检测试剂+通用电脑+自动分析软件。

仪器的性能需要考量:线性范围、检测灵敏度、检测度、反应时间、检测通道数、检测样本量等。

而一台实时荧光定量PCR仪的硬件配置主要看:温控模块、光路检测模块。

1、温度控制模块

温度控制是qPCR技术的核心所在,为了实现高准确度,实时PCR热系统必须确保整个加热块的温度均匀性,确保能够以相同速率的反应处理所有的样本。

1)温控速率

升降温速度快的是好设备,但是单一模块升降温速度快并不代表样本升降温速度也快,所以还要看样本的升降温速度是否也快,注意大升降温速度≠平均升降温速度。

2)温控精度

控温模块中银质半导体控温模块目前是比较好的,因为银是金属中银的导热性能较高,升降温速度快,孔间温度均一性好,边缘效应相应减少。

金属的热传导系数表:银 铜>金> 铝> 铁> 锡>

温度准确度和温度均一性越小越好。

普通的Peltier加热方式具有明显边缘效应,均一性差,是上一代的模块PCR加热技术,正处于被淘汰的边缘,但是成本相对会。

2、光学检测模块

1)光源

光强比较:光强比较:髙强度白光LED > 卤钨灯 >单色LED

白光LED的亮度约是卤钨灯的3倍左右,单色LED10倍左右,能够捕捉到多的荧光信号,是专业光源领域的新技术代表。

寿命比较:寿命比较:髙强度白光LED = 单色LED >卤钨灯

白光LED的寿命长达10000小时以上,一般可以使用5-10年左右,基本上超过了一般科研仪器的正常工作寿命,基本终身无需换光源,而卤钨灯光源基本每2年就要换一次,费时费力,南方是不足一年就要换一次。

2)检测器

荧光定量PCR灵敏度:冷CCDCCD>光电倍增管 CPM >光电二管

CCD作为荧光信号的接受器,其质量直接决定了仪器的检测灵敏度和稳定性。10℃的冷CCD,和常温CCD有着质的区别,在专业光学领域,冷CCD的造价成本至少要比常规CCD高出一倍以上。冷CCD在低的温度下进行光信号捕捉,能够提供高的光感灵敏度和低背景噪音。因此,有的荧光定量PCR能够稳定区分10002000拷贝的浓度差异,而有的只能做到区分500010000个拷贝数。

3)光路传导

光路设计应尽可能有效消除边缘效应,光路设计是否有效消除孔间边缘效应,可以自行进行实验检验。

除上诉两个硬件配置外,现有的荧光定量PCT仪均搭配有控制系统,可与PC连接,或者内置触控屏,同时会配有分析软件功能,越简单越好。

3、性能

1)温度控制模块

采用银质半导体温控模块和多点温控技术,温度准确度±0.1℃、温度均一性±0.1℃,确保实验度,大升降温度速度12/s,半小时可完成扩增反应。

2)光学检测模块

光源采用免维护白光LED灯,光源强度大;高灵敏度光电传感器,检测灵敏度比CCD探测器高10倍,无孔间的边缘干扰影响;光路传导采用侧底部采光,每个反应孔都拥有光纤传输,使用佳滤光片组合,无孔间检测干扰。