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猪场非洲猪瘟病毒检测样本采样方法
发布时间2019-11-13 浏览次数：424
非洲猪瘟病毒，具有庞大而复杂的基因组，拥有的体外生存能力，虽然宿主单一，只感染猪和野猪，但传播源和传播途径都十分复杂。因为非洲猪瘟病毒的这些特点，导致非洲猪瘟的防控工作实施难度大。
能否在感染之前，及时地把非洲猪瘟病毒“揪”出来，是能否有效避免非洲猪瘟病毒侵害的关键之一。在复产方面，猪场能否成功，清场后是否做到净化非洲猪瘟病毒，必须通过的环境监测来验证。
2019年4月，农业农村部发布《关于加强养殖环节非洲猪瘟疫情排查的通知》，鼓励规模猪场和种猪场开展非洲猪瘟自检，荧光定量PCR检测是可以替代病毒分离鉴定的一种灵敏、特异、快速的ASFV检测技术，被认为是ASFV核酸检测的金标准，被用在OIE所有的区域性参考实验室。不少规模猪场开始自我配备相应设备开始自检，但很多人对如何有效采集检测样本比较疑惑，今天小编为大家简单介绍一下：
1、血液采样
使用含有抗凝血剂(EDTA)的无菌管(真空采血管)从颈静脉、下腔静脉或耳静脉抽取全血。如果动物已经死亡，可以从心脏中采血，但必须立即进行。避免使用肝素(绿色盖子)，因为其可以抑制PCR反应(造成假阴性)，和/或由于红细胞吸附试验(HAD)造成假阳性的产生。但采集血液要求猪场技术人员能熟练操作，否则易造成猪流血污染，导致病毒扩散，所以不建议猪场频繁采血检测；
2、唾液采样
在正常生产情况下，病毒可能在1~2个月前就出现在唾液中了。因此，与血液检测相比，通过唾液检测，能够较早地发现猪只是否感染了病毒。不仅如此，猪只感染ASFV后，先出现在口腔中，时间可能长达2~3个月。“口腔内局部感染阶段是非洲猪瘟窗口期检测的重要时机，此时尚未形成病毒血症，积采取措施能有效防控病毒爆发及扩散。唾液采集要求：
（1）采集的唾液样本要求清亮、透明并不得含有食物残渣，故采样之前的停食至关重要，原则上要求停食 12 小时以上；
（2）唾液中含有丰富的具备活性的酶。机体健康状态不同，酶的含量也千差万别，从而导致唾液中的病原体半衰期长短不一，对于非洲猪瘟病毒来说，长者 2～3 天，短者 1～2 小时不等。病原半衰期的存在是导致唾液学非洲猪瘟病毒漏检率稍高的重要因素之一。因此采集完唾液要及时冰冻保存，并在三小时内完成检测。
3、环境、人员采样
对于未发病猪场，及时了解生产生活区、周边环境、装猪台、盘猪场等地区消毒是否彻底，有没受到非洲猪瘟威胁？猪场换养猪工人，管理人员进出猪场，是否带毒？猪场想要复养，但猪栏内非洲猪瘟病毒情况如何？因此猪场环境、人员采样检测显得尤为重要。
（1）采样工具准备：在采样管内添加1ml无菌生理盐水，准备无菌棉签；
（2）猪场环境采样：将无菌棉签在猪场环境表面进行擦拭，放入生理盐水中洗脱待检。
（3）人员采样：将无菌棉签润湿生理盐水后在身体表面耳朵、头发、鼻孔、手指等进行擦拭；
环境样本推荐使用商品化的核酸提取试剂盒提取样本DNA进行PCR检测。按照提取试剂盒说明书操作步骤提取。
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