既然要买设备,买台高的荧光定量PCR仪安心!

发布时间2022-03-01        浏览次数：231

所谓real-time Q-PCR技术，是指在PCR反应体系中加入荧光基因，利用荧光信号累积实时监测整个PCR进程，后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。

目前购买荧光定量PCR仪，一般包括：实时荧光定量PCR仪+开机检测试剂+通用电脑+自动分析软件。

仪器的性能需要考量：线性范围、检测灵敏度、检测度、反应时间、检测通道数、检测样本量等。

而一台实时荧光定量PCR仪的硬件配置主要看：温控模块、光路检测模块。

1、温度控制模块

温度控制是qPCR技术的核心所在，为了实现高准确度，实时PCR热系统必须确保整个加热块的温度均匀性，确保能够以相同速率的反应处理所有的样本。

（1）温控速率

升降温速度快的是好设备，但是单一模块升降温速度快并不代表样本升降温速度也快，所以还要看样本的升降温速度是否也快，注意大升降温速度≠平均升降温速度。

（2）温控精度

控温模块中银质半导体控温模块目前是比较好的，因为银是金属中银的导热性能较高，升降温速度快，孔间温度均一性好，边缘效应相应减少。

金属的热传导系数表：银 ＞ 铜＞金＞ 铝＞ 铁＞ 锡＞ 铅 。

温度准确度和温度均一性越小越好。

普通的Peltier加热方式具有明显边缘效应，均一性差，是上一代的模块PCR加热技术，正处于被淘汰的边缘，但是成本相对会。

2、光学检测模块

（1）光源

光强比较：光强比较：髙强度白光LED ＞ 卤钨灯 ＞单色LED

白光LED的亮度约是卤钨灯的3倍左右，单色LED的10倍左右，能够捕捉到多的荧光信号，是专业光源领域的新技术代表。

寿命比较：寿命比较：髙强度白光LED = 单色LED ＞卤钨灯

白光LED的寿命长达10000小时以上，一般可以使用5-10年左右，基本上超过了一般科研仪器的正常工作寿命，基本终身无需换光源，而卤钨灯光源基本每2年就要换一次，费时费力，南方是不足一年就要换一次。

（2）检测器

荧光定量PCR灵敏度：冷CCD＞CCD＞光电倍增管 CPM ＞光电二管

CCD作为荧光信号的接受器，其质量直接决定了仪器的检测灵敏度和稳定性。10℃的冷CCD，和常温CCD有着质的区别，在专业光学领域，冷CCD的造价成本至少要比常规CCD高出一倍以上。冷CCD在低的温度下进行光信号捕捉，能够提供高的光感灵敏度和低背景噪音。因此，有的荧光定量PCR能够稳定区分1000和2000拷贝的浓度差异，而有的只能做到区分5000和10000个拷贝数。

（3）光路传导

光路设计应尽可能有效消除边缘效应，光路设计是否有效消除孔间边缘效应，可以自行进行实验检验。

除上诉两个硬件配置外，现有的荧光定量PCT仪均搭配有控制系统，可与PC连接，或者内置触控屏，同时会配有分析软件功能，越简单越好。

3、性能

（1）温度控制模块

采用银质半导体温控模块和多点温控技术，温度准确度±0.1℃、温度均一性±0.1℃，确保实验度，大升降温度速度12℃/s，半小时可完成扩增反应。

（2）光学检测模块

光源采用免维护白光LED灯，光源强度大；高灵敏度光电传感器，检测灵敏度比CCD探测器高10倍，无孔间的边缘干扰影响；光路传导采用侧底部采光，每个反应孔都拥有光纤传输，使用佳滤光片组合，无孔间检测干扰。